脂肪酸色譜分析儀
【執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)】GB 5009.168-2016 食品安家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測(cè)定
GB 5413.27-2010 食品安家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測(cè)定
【應(yīng)用原理】
1 水解-提取法:試樣經(jīng)水解-y醚溶液提取其中的脂肪后,在堿性條件下皂化和甲酯化,生成脂肪酸甲酯,經(jīng)毛細(xì)管柱氣相色譜分析,外標(biāo)法定量測(cè)定脂肪酸的含量。動(dòng)植物純油脂試樣不經(jīng)脂肪提取,直接進(jìn)行皂化和脂肪酸甲酯化
2 乙酰氯-甲醇法(適用于含水量小于5%的乳粉和無水奶油試樣):乙酰氯與甲醇反應(yīng)得到的鹽酸-甲醇使其中的脂肪和游離脂肪酸甲酯化,用甲苯提取后,經(jīng)氣相色譜儀分離檢測(cè),外標(biāo)法定量。
酯交換法(適用于游離脂肪酸含量不大于2%的油脂):將油脂溶解在異辛烷中,加入氫氧化鉀甲醇溶液通過酯交換甲酯化,反應(yīng)*后,用硫酸氫鈉中和剩余氫氧化鉀,外標(biāo)法定量測(cè)定脂肪酸的含量。
【試劑和材料】
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。
1 試劑
1.1 鹽酸(HCl)。
1.2 氨水(NH3·H2O)。
1.3 焦性沒食子酸(C6H6O3)。
1.4 y醚(C4H10O)。
1.5 石油醚:沸程30℃~60℃。
1.6 乙醇(C2H6O)(95%)。
1.7 甲醇(CH3OH):色譜純。
1.8 氫氧化鈉(NaOH)。
1.9 正庚烷[CH3(CH2)5CH3]:色譜純。
1.10 sf化硼甲醇溶液,濃度為15%。
1.11 無水硫酸鈉(Na2SO4)。
1.12 氯化鈉(NaCl)。
2 試劑配制
2.1 鹽酸溶液(8.3mol/L):量取250mL鹽酸,用110mL水稀釋,混勻,室溫下可放置2個(gè)月。
2.2 y醚-石油醚混合液(1+1):取等體積的y醚和石油醚,混勻備用。
2.3 氫氧化鈉甲醇溶液(2%):取2g氫氧化鈉溶解在100mL甲醇中,混勻。
2.4 飽和氯化鈉溶液:稱取360g氯化鈉溶解于1.0L水中,攪拌溶解,澄清備用。
2.5 氫氧化鉀甲醇溶液(2mol/L):將13.1g氫氧化鉀溶于100mL無水甲醇中,可輕微加熱,加入無
水硫酸鈉干燥,過濾,即得澄清溶液。
3 標(biāo)準(zhǔn)品
3.1 十一碳酸甘油三酯(C36H68O6,CAS號(hào):13552-80-2)。
3.2 混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品。
3.3 單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品:見附錄A。
4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
4.1 十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液(5.00mg/mL):準(zhǔn)確稱取2.5g(精0.1mg)十一碳酸甘油三酯
燒杯中,加入甲醇溶解,移入500mL容量瓶后用甲醇定容,在冰箱中冷藏可保存1個(gè)月。
4.2 混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液:取出適量脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)移到10mL容量瓶中,用正庚烷稀
釋定容,貯存于-10℃以下冰箱,有效期3個(gè)月。
4.3 單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液:將單個(gè)脂肪酸甲酯分別從安瓿瓶中取出轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中,用
正庚烷沖洗安瓿瓶,再用正庚烷定容,分別得到不同脂肪酸甲酯的單標(biāo)溶液,貯存于-10 ℃以下冰箱,
有效期3個(gè)月。
脂肪酸色譜分析儀
【儀器配置清單】
1.勻漿機(jī)或?qū)嶒?yàn)室用組織粉碎機(jī)或研磨機(jī)。
2.氣相色譜儀:GC-2090具有氫火焰離子檢測(cè)器(FID)+毛細(xì)管進(jìn)樣口。
自動(dòng)進(jìn)樣器：液體自動(dòng)進(jìn)樣裝置
色譜工作站：反控版
氣體發(fā)生器：氮?dú)淇找惑w機(jī)
3.毛細(xì)管色譜柱:聚二氰丙基硅氧烷強(qiáng)極性固定相,柱長(zhǎng)100m,內(nèi)徑0.25mm,膜厚0.2μm。
4.恒溫水浴:控溫范圍40℃~100℃,控溫±1℃。
5.分析天平:感量0.1mg。
6.旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
【脂肪酸測(cè)定方法】
1.色譜參考條件
取單個(gè)脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液和脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入氣相色譜儀,對(duì)色譜峰進(jìn)行定性。
脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖,見附錄B。
a) 毛細(xì)管色譜柱:聚二氰丙基硅氧烷強(qiáng)極性固定相,柱長(zhǎng)100m,內(nèi)徑0.25mm,膜厚0.2μm。
b) 進(jìn)樣器溫度:270℃。
c) 檢測(cè)器溫度:280℃。
d) 程序升溫:初始溫度100℃,持續(xù)13min;
100℃~180℃,升溫速率10℃/min,保持6min;
180℃~200℃,升溫速率1℃/min,保持20min;
200℃~230℃,升溫速率4℃/min,保持10.5min。
e) 載氣:氮?dú)狻?/span>
f) 分流比:100∶1。
g) 進(jìn)樣體積:1.0μL。
h) 檢測(cè)條件應(yīng)滿足理論塔板數(shù)(n)少2000/m,分離度(R)少1.25。
2.試樣測(cè)定
試樣溶液的測(cè)定
3.在上述色譜條件下將脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定液及試樣測(cè)定液分別注入氣相色譜儀,以色譜峰峰面積定量。
脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化
在脂肪提取物中加入2%氫氧化鈉甲醇溶液8mL,連接回流冷凝器,80℃±1℃水浴上回流,直油滴消失。從回流冷凝器上端加入7mL15%溶液,在80 ℃±1 ℃水浴中繼續(xù)回流2min。用少量水沖洗回流冷凝器。停止加熱,從水浴上取下燒瓶,迅速冷卻室溫。準(zhǔn)確加入10mL~30mL正庚烷,振搖2min,再加入飽和氯化鈉水溶液,靜置分層。吸取上層正庚烷提取溶液大約5mL,25mL試管中,加入大約3g~5g無水硫酸鈉,振搖1min,靜置5min,吸取上層溶液到進(jìn)樣瓶中待測(cè)定
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